Contoh Pendahuluan dalam Laporan Praktikum Mikrobiologi

Berikut merupakan contoh bagian tujuan dan metode kerja yang terdapat dalam laporan praktikum bioteknologi mikroba dengan judul:

Transformasi Tanaman Tembakau (Nicotiana tabacum) dengan Perantara Bakteri Agrobacterium tumefaciens menggunakan Vektor Plasmid pCambia 1303

Tujuan Praktikum

  1. Menentukan hasil kualitatif uji histokimia GUS dari hasil transformasi tanaman tembakau (Nicotiana tabacum) dengan perantara Agrobacterium tumefaciens
  2. Menentukan area dominan ekspresi β-glukosidase pada tanaman tembakau (Nicotiana tabacum) hasil transformasi menggunakan vektor plasmid pCambia 1303

 

Bahan dan Metode Kerja

Persiapan kultur kecil bakteri

Tahap persiapan kultur kecil bakteri dilakukan dengan menggores Agrobacterium tumefaciens yang telah membawa plasmid pCambia 1303 pada medium padat YEP yang mengandung antibiotik ampisilin 100 ppm dan kanamisin 50 ppm. Hasil goresan tersebut kemudian diinkubasi dalam kondisi gelap selama ± 3 hari pada suhu ruang. Koloni tunggal kemudian dicuplik untuk selanjutnya diinokulasi ke dalam 10 mL medium cair YEP yang mengandung antibiotik ampisilin 100 ppm dan kanamisin 50 ppm. Hasil cuplikan kemudian diinkubasi pada shaker suhu ruang dalam kondisi gelap selama ± 2 – 3 hari

Persiapan kultur besar bakteri dan pemanenan pelet bakteri

Tahap persiapan kultur besar bakteri diawali dengan 10 mL kultur cair Agrobacterium tumefaciens yang dimasukkan ke dalam 40 mL medium YEP cair dengan kandungan antibiotik yang sesuai. Setelah itu, kultur diinkubasi pada shaker suhu ruang hingga OD600 mencapai 0,8—1 (diukur setiap 60 menit). Setelah OD600 mencapai 0,8—1 , kultur selanjutnya disentrifugasi dengan kecepatan 7000 rpm selama 3 menit untuk melakukan pemanenan pelet bakteri.

Transformasi tanaman tembakau

Transformasi tanaman tembakau diawali dengan melarutkan pelet bakteri ke dalam 50 mL medium infiltrasi. Setelah itu, potongan daun dan tangkai tanaman kultur tembakau dimasukkan ke dalam medium infiltrasi. Pada tahap terakhir, dilakukan ko-kultivasi pada shaker suhu ruang dalam kondisi gelap selama ± 3—4 hari.

Uji histokimia GUS

Pengujian histokimia GUS diawali dengan cara mengambil potongan daun dan tangkai tanaman tembakau yang telah ditransformasi dikeringkan dengan menggunakan kertas saring. Potongan tersebut lalu dimasukkan ke dalam media disinfeksi, dan digoyang selama  ± 10 menit. Setelah melalui media disinfeksi, potongan daun dan tangkai selanjutnya dimasukkan ke dalam akuades steril, lalu kembali digoyang selama ±  5 menit untuk pembilasan.

Tahap pemasukkan daun ke dalam media disinfeksi dan akuades steril diulang sebanyak tiga kali. Selanjutnya, potongan daun dan tangkai yang telah di-disinfeksi dikeringkan dengan menggunakan kertas saring, lalu dipindahkan ke dalam larutan GUS. Tahap selanjutnya dilakukan inkubasi pada suhu ruang dalam kondisi gelap selama ± 2 hari. Setelah diinkubasi selama 2 hari, daun dan tangkai selanjutnya dipindahkan ke dalam alkohol 70% dan didiamkan selama 24 jam.

Lihat lebih banyak panduan serupa di Laporanpraktikum.id

One Reply to “Contoh Pendahuluan dalam Laporan Praktikum Mikrobiologi”

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *